層析柱的操作方法介紹

将一定量薄層層析矽膠裝入搪瓷盤置於烘箱中，於105。C活化2H後，取出放置室溫即可裝柱。柱子採用幹法填充，填滿整個柱體，不留死體積，密封後用柱塞式計量溶劑泵按丙酮一石油醚(5：95)比例泵入溶劑，至溶劑流出止。

2.上樣

将冬淩草的乙醇提取物400G用适量丙酮溶解，泵入中壓柱柱頭，然後泵入石油醚1000RID。

3.洗脫

以一定比例的石油醚一丙酮爲洗脫液，60ML/MIN的流速進行梯度洗脫，柱的使用壓力爲2～ 3KG/C 。按每份500ML收集，TLC檢識展開劑丙酮一*仿(2：8)，顯色劑5%香草醛濃硫酸乙醇液

至洗脫*，相同流份合並(bìng)，回收溶劑。将冬淩草甲素流份合並(bìng)蒸幹(gàn)。加入适量甲醇熱溶後自然放置，析出結晶，爲冬淩草甲素。

4.層析柱再生、平衡

有效成分經TLC檢識全部流出後，用純丙酮5000ML再生，丙酮一石油醚(5：95)平衡後，可再次上樣，反複使用(使用次數随原料不同而異，一般可連續使用2—6個月以上)。

5.重結晶

冬淩草甲素結晶析出*後，減壓過濾，然後用少量甲醇洗滌(洗滌液保留，作下次熱溶冬淩草甲素用)。将冬淩草甲素再用适量甲醇熱溶後放置，結晶再次析出，待結晶*後，抽濾，用少量乙*洗滌，将結晶室溫下晾幹後置真空幹燥箱中，35度真空幹燥至恒重。密封於瓶中，置幹燥器中保存。

6.薄層層析分析

取适量冬淩草甲素對照品及由上述方法得到的冬淩草甲素樣品甲醇溶解後點於同一矽膠G薄層闆上，以*仿一丙酮(8：2)爲展開劑進行展開，5% 香草醛濃硫酸乙醇液顯色，於105。C烘至斑點清晰。表明在該展開系統下，冬淩草甲素樣品和對照品都具有相同的RF值，並呈現出同樣的藍綠色斑點，在制備的冬淩草甲素樣品中，沒有雜質斑痕。