關於(yú)層(céng)析柱裝柱、使用及相關注意事項
（1）、裝柱前要仔細看填料的使用說明書(shū)，每種填料都有自己的特性，以及特殊的裝柱方法，針對(duì)不同的空柱，也要注意方法可能不同；
3、這一點(diǎn)非常重要：裝柱包括以後(hòu)使用中不允許柱内進入氣泡（bubble free），柱頭事先也要排除氣泡。
（2）、填料要加水攪(jiǎo)拌成均勻懸液，懸液濃(nóng)度依填料而不同，一般70－85%，迅速倒入空柱内，或吸或壓，流速和具體步驟看說明書。
（3）、所有柱子盡量做到填料均勻，尤其是用於(yú)凝膠層析的柱子。裝柱完成後，可用柱效測(cè)定的方法檢查裝填效果。一個裝填合格的柱子的理論塔闆高度應是填料平均粒徑的2－4 倍，在此範圍内越小越好。
（4）、選擇合适的泵，**是流速滿足要求，脈沖(chōng)盡(jǐn)量小。柱塞泵。
（5）、準備(bèi)上柱的液體應進行過(guò)濾，至少是0.45micrometre。
（6）、關於(yú)純化，**要考慮的是你的目标：純度、數量、速度、收率等等，再根據樣品的具體情況，尤其是目标蛋白的性質，確(què)定純化策略。通常三步曲：capture、purification、polishing。*步先從大量或複雜樣品中将目标蛋白%26ldquo;抓出%26rdquo;，與主要雜質分離；再用高選擇性的層析去除絕大部分雜質；後精細純化，提供純度至設定目标。到實際工作中，不要死靠三步，也許一步也許四步或更多，具體情況具體分析。所謂%26ldquo;三步%26rdquo;隻是一種思路而已。
（7）、至於(yú)測序，我想大概不到1mg 應該足夠瞭(le)。
常壓反相矽(guī)膠(jiāo)柱的使用注意事項
C18反相矽膠的預處(chù)理很簡單(dān)，就是用甲醇浸泡即可。上海五相儀器對其使用作如下說明：使用的時候，将C18反相矽(guī)膠用甲醇混勻，攪拌，可以稍微超聲脫氣泡但不可時間太長(zhǎng)，5分鍾吧。然後(hòu)勻漿裝柱，用甲醇沖(chōng)洗柱子2-3個柱體積，将C18中的交聯劑之類洗掉，然後(hòu)用你的洗脫劑沖(chōng)洗主子2-3個(gè)柱體積。洗脫劑的選擇可以根據液相也可以根據反相闆。如果根據液相的話(huà)，需要将液相條件中的有機相減小10%作爲洗脫劑爲好。然後将你的帶分離物質用洗脫劑溶解，上樣，加洗脫劑沖就可以瞭(le)。反相矽膠可以反複使用，使用次數增多以後，有可能在柱子頂端産(chǎn)生顔色很深的色帶，可以選擇用丙酮沖洗，如果洗不掉可以選擇将其挖去，然後将主子内C18矽膠保存在甲醇中即可。注意不要甲醇幹(gàn)瞭(le)。
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更新時間：2011-06-06
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